猪圆环病毒II型ORF2基因在酵母中的高效分泌表达

为了建立一种简便的检测猪圆环病毒2型(PCV2)的方法,本实验将PCV2的ORF2基因片段整合到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X-33染色体上,构建了X-33(pPICZa-ORF2)重组工程菌.经甲醇诱导后,成功的表达出ORF2基因片段.经过Bradford 蛋白质总含量测定和凝胶薄层扫描结果表明,表达产物占重组工程菌培养上清总蛋白的58%,表达量可达47mg/ L.间接ELISA结果初步表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效地区分PCV2型病毒标准阳性与阴性血清.     

条斑紫菜中一种琼胶多糖的分离纯化及鉴定

条斑紫菜(Porphyra yezoensis)的热水提取物,经DE-23和Sephadex G-200柱层析纯化,得到一种含微量硫酸基的琼胶精品(PY1)。此多糖经Sepharose 6B柱层析鉴定为单一组分,分子量为220 kD。紫外光谱显示它不含蛋白质、多肽及核酸。红外光谱揭示它含3,6_内醚_半乳糖的特征吸收以及微量的硫酸基。该多糖的水解产物经气相色谱分析,主要由半乳糖及其衍生物组成,有少量岩藻糖存在。通过高磺酸氧化和Smith除解以及１３C-NMR谱的分析,该多糖主要由琼胶二糖结构单元和它的生物前体组成,以琼胶二糖为主。     

MCF细胞中人干细胞因子基因新调控元件的鉴定

人干细胞因子（ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ,ｈＳＣＦ）是一个多功能细胞生长因子,调节某些哺乳动物干细胞如原始胚细胞的增殖、分化和移居。为研究ｈＳＣＦ基因的转录调控机理,对ｈＳＣＦ基因５’旁侧序列不同长度片段进行亚克隆,构建系列重组ｐＧＬ２荧光素酶报告基因载体,转染人乳腺癌细胞株ＭＣＦ并检测ｌｕｃ基因一过性表达活性。然后应用电泳迁移率变动分析技术,鉴定活性片段与ＭＣＦ细胞核抽提蛋白质     

定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建

一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术,构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法：用RT-PCR技术,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA,并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理,以导致hSCF cDNA中一小片段缺失,由此获得重组pGEMSCF模拟体(mimic),经体外转录得到hSCF RNA-CRS.测序表明：该RNA-CRS与hSCF mRNA比较,缺失了从第499位至608位共110个核苷酸,但二者RT-PCR反应可用同一对扩增引物,反应动力学极为相似.这种hSCF RNA-CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准,适用于定量RT-PCR中,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析.此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及/或调控的检测和研究.     

低温打蜡对贮藏菠萝黑心病控制的作用

研究了常温、低温、低温加打蜡 3种贮藏条件下菠萝果实硬度、可溶性固形物 (TSS)、可溶性糖醛酸、多聚半乳糖醛酸酶 (PG)和多酚氧化酶 (PPO)等因素的变化 ,及它们对黑心病发生及发展情况的影响。结果表明 ,低温加打蜡可以延缓果肉硬度、可溶性固形物和可溶性糖醛酸含量的下降 ,降低 PG和 PPO的活性 ,降低黑心病的发病率 ,较好的保持果实品质     

早期经验对大鼠脑区一氧化氮合酶活性的影响

目的　探讨NO与早期饲养环境所引起脑效应的关系。方法　将断乳大鼠在丰富环境 (EC)和单调环境 (IC)中饲养 30d。环境暴露后通过NADPH -黄递酶组化方法对海马齿状回 (DEN)和大脑皮层NOS活性进行定量测定以及对大鼠进行Morris水迷宫作业训练。结果　EC大鼠与IC大鼠相比 ,海马齿状回 (DEN)和大脑皮层NOS活性明显下降 ,迷宫测试表明EC大鼠的空间认知显著优于IC大鼠。在环境暴露期间隔日注射一氧化氮合酶 (NOS)抑制物L -NAME(50mg/kg) ,未引起EC或IC大鼠认知行为的明显改变 ,但导致DEN和大脑皮层NOS活性的不同改变。结论　NO可能与早期经验脑效应有关。     

DNA似近距离及进化时间的估算

在似近分析和Ｎｅｉ氏遗传距离的基础上,给出了ＤＮＡ似近距离计算公式,并以ＤＮＡ似近距离估算类群间的分歧时间（进化时间）,应用１０种限制内切酶对猕猴属（ｇｅｎｕｓ Ｍａｃａｃａ）内５个种ｍｔＤＮＡ的切点数据计算了这５个种的ＤＮＡ似近距离和进化时间,比较由ＤＮＡ似近距,遗传距离构建的歧化树和Ｆｏｏｄｅｎ及Ｄｅｌｓｏｎ的形态歧化树表明,除遗传距离的歧化树外,其它三种歧化树都有一个共同点,就是熊猴（Ｍ．ａ     

海南山蛭种群数量动态与气象因素关系研究

在海南岛橡胶林内,每月观测海南山蛭Ｈａｅｍａｄｉｐｓａ ｈａｉｎａｎａ种群数量Ｂａ,用逐步回归分析方法研究了１０个气象因子对海南山６种数量的影响,结果表明,１）每年海南山蛭种群数量不同,６ａ间影响海南山蛭种群数量的主要气候因素是Ｘ１（月雨量）、Ｘ３（月雨日）和Ｘ５（月有露日数）;２）海南岛５～１０月份为雨季,海南山蛭这种群数量明显增大,影响山蛭种群数量的主要气候因素是Ｘ５和Ｘ１６（月最大风速和）和     

人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆和乳酸乳球菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人肝总ＲＮＡ中分离扩增了０．４５ｋｂ的人铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）基因的ｃＤＮＡ序列,首先克隆至大肠杆菌表达质粒ｐＥＴ２３ｂ,进行了序列测定和超高表达,将Ｃｕ／Ｚｎ,ＳＯＤｃＤＮＡ亚克隆至乳酸乳球菌表达载体ｐＭＧ３６ｅ,用电穿孔法将重组质粒ｐＭＧ３６ｅｓｏｄ转化到乳酸乳球菌,获得Ｃｕ／Ｚｎ ＳＯＤ的组成型表达,其表达量约占乳酸乳球菌可溶性蛋白的５％以上,活性染色表     

昆虫细胞（Sf21）悬浮培养过程中生长限制性基质间歇补加技术的 …

基于ｒ２１昆虫细胞在浮过程中所表现出的生长代谢特征,提出以培养液中残糖浓度作为控制参数,并利用限制性基质（葡萄糖和蛋白水解物）的间歇补加技术调控细胞生长的方案。实际控制表明：与批培养相比,Ｓ１ｆ２１细胞在两种具代表性的昆虫水解物）的间歇补加调控细胞生长的方案。实际控制表明：与批培养相比,Ｓｆ２１细胞在两种具代表性的昆虫细胞培养基（ＩＰＬ－４１和ＴＣ－１００）中的生长期和稳定期部都到有效的延长。ＴＣ